Ka shumë heronj të panjohur përreth nesh, të cilët duken të zakonshëm, por në fakt ata në heshtje kontribuojnë shumë për ne. Proteinaza K është "heroi i panjohur" në industrinë e diagnostikimit molekular, megjithëse krahasuar me "të mëdhenjtë dhe të fuqishmit" në industri, proteinaza K është aq e thjeshtë saqë prej kohësh e kemi anashkaluar rëndësinë e saj. Me shpërthimin e epidemisë së re të kurorës, kërkesa për proteinazën K është rritur ndjeshëm, dhe furnizimi brenda dhe jashtë vendit është shumë prapa konsumit, dhe të gjithë papritmas e kuptuan se proteinaza K është kaq e rëndësishme.
Cili është përdorimi i proteinazës K?
Proteinaza K është një proteazë serine me aktivitet enzimatik proteolitik dhe mund të ruajë aktivitetin në një gamë të gjerë mjedisesh (pH (4-12.5), tampon me përmbajtje të lartë kripe, temperaturë e lartë 70°C, etj.). Përveç kësaj, aktiviteti i proteinazës K nuk pengohet nga SDS, ureja, EDTA, hidrokloruri i guanidinës, izotiocianati i guanidinës, etj., dhe një sasi e caktuar detergjenti gjithashtu mund të rrisë aktivitetin e proteinazës K. Në trajtimin mjekësor (dezinfektim nga viruset dhe mikrobet), ushqim (zbutje e mishit), lëkurë (zbutje e flokëve), prodhim vere (pastrim alkooli), përgatitjen e aminoacideve (pupla të degraduara), nxjerrjen e acidit nukleik, hibridizimin in situ, etj., proteinaza K ka zbatime. Zbatimi më i përdorur është nxjerrja e acidit nukleik.
Proteinaza K mund të enzimolizojë të gjitha llojet e proteinave në mostër, duke përfshirë ato histone që janë të lidhura fort me acidet nukleike, në mënyrë që acidet nukleike të mund të çlirohen nga mostra dhe të lirohen në ekstrakt, duke lehtësuar hapin tjetër të nxjerrjes dhe pastrimit. Në zbulimin e acidit nukleik viral, proteinaza K është një nga përbërësit e rëndësishëm në tretësirën e marrjes së mostrave të virusit. Proteinaza K mund të çajë dhe inaktivizojë proteinën e mbulesës së virusit, e cila është më e sigurt gjatë fazës së transportit dhe zbulimit; përveç kësaj, proteinaza K gjithashtu mund të degradojë RNazën, duke parandaluar degradimin e ARN-së virale dhe lehtëson zbulimin e acidit nukleik.
Fama brenda natës e proteinazës K
Qoftë në fushën e kërkimit shkencor apo në fushën e IVD-së, nxjerrja e acidit nukleik është eksperimenti më themelor, kështu që proteinaza K ka qenë gjithmonë një ekzistencë shumë e rëndësishme. Megjithatë, në të kaluarën, proteinaza K ishte shumë më pak e njohur sesa roli i saj. Një pjesë e madhe e kësaj ishte për shkak se marrëdhënia e ofertës dhe kërkesës së proteinazës K ishte shumë e qëndrueshme. Pak njerëz do të mendonin se furnizimi me proteinazë K do të ishte problem.
Me shpërthimin e epidemisë së re të kurorës, kërkesa për testimin e acidit nukleik është rritur ndjeshëm. Deri në fund të qershorit 2020, Kina ka përfunduar gati 90 milionë teste të reja të kurorës, dhe ky numër është edhe më alarmues në shkallë globale. Në eksperimentet e nxjerrjes së acidit nukleik, përqendrimi i punës i proteinazës K është rreth 50-200 μg/mL. Në përgjithësi, duhen rreth 100 μg proteinazë K për të nxjerrë një mostër të acidit nukleik. Në përdorim aktual, për të rritur efikasitetin e nxjerrjes së acidit nukleik, shpesh Proteinaza K përdoret në një sasi të shtuar. Zbulimi i acidit nukleik të koronavirusit të ri ka sjellë një sasi të madhe kërkese për proteinazën K. Bilanci fillestar i ofertës dhe kërkesës së proteinazës K u prish shpejt, dhe proteinaza K u bë një material i rëndësishëm për parandalimin e epidemisë brenda natës.
Vështirësitë në prodhimin e proteinazës K
Edhe pse me zhvillimin e epidemisë, vlera e rëndësishme e proteinazës K është vlerësuar nga njerëzit, është e turpshme që për shkak të nivelit të ulët të proteinazës K, pak kompani vendase janë përfshirë në prodhimin e proteinazës K. Kur njerëzit duan të krijojnë prodhimin e proteinazës K, gjatë procesit të prodhimit, u zbulua se proteinaza K është një proteinë jashtëzakonisht e veçantë. Është jashtëzakonisht sfiduese të zgjerohet kapaciteti i prodhimit të proteinazës K në një periudhë të shkurtër kohore.
Prodhimi në shkallë të gjerë i proteinazës K përballet me vështirësitë e mëposhtme:
1. Shprehje e ulët
Proteinaza K mund të degradojë në mënyrë jo specifike shumicën e proteinave dhe të shkaktojë toksicitet serioz në qelizën pritëse që shpreh. Prandaj, niveli i shprehjes së proteinazës K është përgjithësisht shumë i ulët. Shqyrtimi i sistemeve të shprehjes dhe llojeve që shprehin shumë proteinazën K në përgjithësi kërkon një cikël më të gjatë.
2. Mbetjet e pigmenteve dhe acideve nukleike
Fermentimi në shkallë të gjerë fut një sasi të madhe pigmenti dhe mbetjesh të acidit nukleik të strehuesit. Është e vështirë të hiqen këto papastërti me një proces të thjeshtë pastrimi, dhe pastrimi kompleks rrit koston dhe ul shkallën e rikuperimit.
3. Paqëndrueshmëria
Proteinaza K nuk është mjaftueshëm e qëndrueshme, mund të enzimolizohet vetë dhe është e vështirë ta ruash atë në mënyrë të qëndrueshme në 37°C për një kohë të gjatë pa një agjent mbrojtës.
4. Lehtë për t’u precipituar
Gjatë përgatitjes së pluhurit të tharë me ngrirje të proteinazës K, për të siguruar që përmbajtja e ngurtë e proteinazës K në pluhurin e tharë me ngrirje të jetë e madhe, është e nevojshme të shtohet një agjent mbrojtës i tharë me ngrirje në një përqendrim të lartë, por kur përqendrimi i proteinazës K arrin 20mg/mL dhe më lart, është e lehtë. Agregimi formon një precipitat, i cili sjell vështirësi të mëdha në tharjen me ngrirje të proteinazës K me një përmbajtje të lartë të ngurtë.
5. Investim i madh
Proteinaza K ka aktivitet të fortë proteazik dhe mund të hidrolizojë proteaza të tjera në laborator. Prandaj, proteinaza K kërkon zona prodhimi, pajisje dhe personel të specializuar për kërkim, zhvillim dhe prodhim.
Tretësira e proteinazës K e XD BIOCHEM
XD BIOCHEM ka një platformë të pjekur për shprehjen dhe pastrimin e proteinave, dhe ka përvojë të pasur në shprehjen dhe pastrimin e proteinave rekombinante dhe optimizimin e proceseve të prodhimit. Nëpërmjet formimit të shpejtë të një ekipi kërkimor dhe zhvillimi, është kapërcyer procesi i prodhimit në shkallë të gjerë të proteinazës K. Prodhimi mujor i pluhurit të ngrirë të tharë është më shumë se 30 KG. Produkti ka performancë të qëndrueshme, aktivitet të lartë specifik enzimatik dhe nuk ka mbetje të citokromit pritës dhe acidit nukleik. Mirë se vini të kontaktoni XD BIOCHEM Merrni një paketë prove (Email:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
Zgjidhjet teknike të XD BIOCHEM përfshijnë
Duke përdorur integrimin e plazmideve me shumë kopje, zgjidhen shtame me shprehje të lartë me një nivel shprehjeje prej 8g/L, gjë që kapërcen problemin e nivelit të ulët të shprehjes së proteinazës K.
Përmes krijimit të një procesi pastrimi me shumë hapa, citokromi pritës dhe mbetjet e acidit nukleik të proteinazës K u hoqën me sukses nën vlerën standarde.
Përmes shqyrtimit me rendiment të lartë të formulimeve tampon mbrojtës, u zgjodh një tampon që mund ta ruajë në mënyrë të qëndrueshme proteinazën K në 37°C.
Tamponët e shqyrtimit kapërcejnë problemin që proteinaza K është e lehtë të agregohet dhe të precipitohet në përqendrime të larta, dhe hedh themelet për tharjen me ngrirje të proteinazës K me përmbajtje të lartë të lëndëve të ngurta.
Mostra e proteinazës K XD BIOCHEM
Testi i stabilitetit të proteinazës K XD BIOCHEM: nuk do të ketë ndryshim të rëndësishëm në aktivitet pas 80 ditësh në temperaturë ambienti
Testi i stabilitetit të proteinazës K XD BIOCHEM: nuk do të ketë ndryshim të rëndësishëm në aktivitet pas 80 ditësh në temperaturë ambienti.
Krahasimi i efektit të nxjerrjes së acidit nukleik të proteinazës K XD BIOCHEM dhe produkteve konkurruese. Në procesin e nxjerrjes së acidit nukleik, përdoren përkatësisht XD BIOCHEM dhe proteinaza konkurruese K. Efikasiteti i nxjerrjes së proteinazës K XD BIOCHEM është më i lartë dhe vlera Ct e gjenit të synuar është më e ulët.
Koha e postimit: 31 dhjetor 2021