4-Nitrofenil beta-D-galaktopiranozid CAS:200422-18-0

Efekti: ONPG është një substrat i përdorur posaçërisht për të zbuluar praninë dhe aktivitetin e enzimës β-galaktozidazë. Kur enzima β-galaktozidazë është e pranishme dhe aktive, ajo e zbërthen ONPG në dy produkte: o-nitrofenol dhe një derivat të galaktozës. Çlirimi i o-nitrofenolit rezulton në një ndryshim të ngjyrës së verdhë, i cili mund të matet duke përdorur një spektrofotometër.

Zbatimi: ONPG ka disa zbatime në kërkimin e biologjisë molekulare dhe biokimisë:

Përcaktimi i aktivitetit të β-galaktozidazës: ONPG përdoret zakonisht për të matur dhe përcaktuar sasinë e aktivitetit të enzimës β-galaktozidazë. Shkalla e formimit të o-nitrofenolit, e cila është drejtpërdrejt proporcionale me aktivitetin enzimatik, mund të matet në mënyrë spektrofotometrike.

Shprehja dhe rregullimi i gjeneve: ONPG përdoret shpesh në eksperimente që lidhen me studimet e shprehjes dhe rregullimit të gjeneve. Përdoret shpesh në analizat e proteinave të shkrirjes, siç është sistemi i shkrirjes lacZ që përdoret zakonisht, për të studiuar shprehjen e gjeneve nën kontrollin e promotorëve specifikë. Aktiviteti i beta-galaktozidazës i matur duke përdorur ONPG ofron njohuri mbi nivelin e shprehjes së gjeneve.

Shqyrtimi për aktivitetin e β-galaktozidazës: ONPG mund të përdoret si një metodë shqyrtimi kolorimetrike në teknologjinë e ADN-së rekombinante për të identifikuar praninë dhe funksionalitetin e gjenit LacZ, i cili kodon β-galaktozidazën. Kjo metodë shqyrtimi ndihmon në identifikimin e kloneve që përmbajnë gjenin me interes.

Studimet e kinetikës së enzimave: ONPG është gjithashtu i dobishëm në studimin e kinetikës së enzimës β-galaktozidazë. Duke matur shkallën e reaksionit enzimë-substrat në përqendrime të ndryshme të substratit, është e mundur të përcaktohen parametrat kinetikë siç janë konstantet Michaelis-Menten (Km) dhe shkallët maksimale të reaksionit (Vmax).