4-Nitrofenil beta-D-galaktopiranozid CAS:200422-18-0

Efekti: ONPG është një substrat i përdorur posaçërisht për të zbuluar praninë dhe aktivitetin e enzimës β-galaktozidazë.Kur enzima β-galaktozidazë është e pranishme dhe aktive, ajo ndan ONPG në dy produkte: o-nitrofenol dhe një derivat të galaktozës.Çlirimi i o-nitrofenolit rezulton në një ndryshim të ngjyrës së verdhë, e cila mund të matet duke përdorur një spektrofotometër.

Aplikimi: ONPG ka disa aplikime në biologjinë molekulare dhe kërkimin biokimik:

Përcaktimi i aktivitetit të β-galaktozidazës: ONPG përdoret zakonisht për të matur dhe për të përcaktuar sasinë e aktivitetit të enzimës β-galaktozidazë.Shpejtësia e formimit të o-nitrofenolit, e cila është drejtpërdrejt proporcionale me aktivitetin e enzimës, mund të matet në mënyrë spektrofotometrike.

Shprehja dhe rregullimi i gjeneve: ONPG përdoret shpesh në eksperimente që lidhen me studimet e shprehjes dhe rregullimit të gjeneve.Përdoret shpesh në analizat e proteinave të shkrirjes, siç është sistemi i shkrirjes lacZ i përdorur zakonisht, për të studiuar shprehjen e gjeneve nën kontrollin e promotorëve specifikë.Aktiviteti i beta-galaktozidazës i matur duke përdorur ONPG ofron njohuri për nivelin e shprehjes së gjeneve.

Ekzaminimi për aktivitetin e β-galaktozidazës: ONPG mund të përdoret si një metodë e shqyrtimit kolorimetrik në teknologjinë rekombinante të ADN-së për të identifikuar praninë dhe funksionalitetin e gjenit LacZ, i cili kodon β-galaktozidazën.Kjo metodë e shqyrtimit ndihmon në identifikimin e kloneve që përmbajnë gjenin e interesit.

Studimet e kinetikës së enzimës: ONPG është gjithashtu i dobishëm në studimin e kinetikës së enzimës β-galaktozidazë.Duke matur shpejtësinë e reaksionit enzimë-substrat në përqendrime të ndryshme të substratit, është e mundur të përcaktohen parametrat kinetikë si konstantet Michaelis-Menten (Km) dhe shpejtësitë maksimale të reagimit (Vmax).